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胎牛血清的這些指標你都知道嗎?

牛血清是細胞培養中用量最大的天然培養基,含有豐富的細胞生長必須的營養成份,常用于動物細胞的體外培養,具有極為重要的功能。
1.提供對維持細胞指數生長的激素,基礎培養基中沒有或量很少的營養物,以及主要的低分子營養物。
2. 提供結合蛋白,能識別維生素、脂類、金屬和其他激素等,能結合或調變它們所結合的物質活力。
3.有些情況下結合蛋白質能與有毒金屬和熱原質結合,起到解毒作用。
4.是細胞貼壁、鋪展在塑料培養基質上所需因子來源。
5.起酸堿度緩沖液作用。
6.提供蛋白酶抑制劑,使在細胞傳代時使剩余胰蛋白酶失活,保護細胞不受傷害。


胎牛血清都有哪些重要的指標


一、內毒素
內毒素是革蘭氏陰性菌的細胞壁外壁層上的特有成分。當細菌死亡自溶或粘附在其它細胞時,才表現其毒性。內毒素直接參與細胞凋亡,血清中內毒素含量越低,對細胞毒性越小,越利于細胞的生長和傳代;內毒素含量過高,會直接導致細胞提前老化。國際上規定,胎牛血清的級別,應以內毒素水平的高低來確定,其中,特級胎牛血清的內毒素應<10EU/ml

二、血紅蛋白含量
胎牛血清的顏色會根據血紅蛋白含量的不同表現出黃色、淡黃色、橘紅色、微紅色等。細胞培養用血清的標準是血紅蛋白含量不高于20mg/dl,顏色越紅,數值越高;反之,數值越低。實際上,血紅蛋白含量的高低對血清并無直接影響。這個指標的意義在于能體現出采血過程的嚴謹規范程度,良好的操作能降低血清的溶血。

三、總蛋白含量
胎牛血清的總蛋白含量一般范圍是30-40mg/ml,數值偏高,說明采血的牛齡偏大,不是胎牛;數值偏低,表明血清可能摻水了。

四、pH值
根據藥典,胎牛血清的pH值在7.0-8.0之間,并沒有什么具體依據把進口血清和國產血清用7.5這個分界線界定。

五、滲透壓
胎牛血清滲透壓的檢測一般采用冰點法,滲透壓摩爾濃度(mOsmol/kg):280-360之間

六、微生物
包括細菌、霉菌、支原體、噬菌體等。隨著各個品牌血清生產條件的改善提高,細菌、霉菌等“大型”微生物幾乎能100%控制。支原體通過0.1um3次無菌過濾去除。如CellMax胎牛血清,3次0.1um無菌過濾以后,又通過培養法和DNA染色法進行支原體檢測,結果均呈現陰性才會放行銷售。關于噬菌體主要是生產環境過程中帶入,又無法過濾,很難徹底清除,但對血清質量影響不大,不過對于工業生產的客戶來說,往往會采用γ照射的胎牛血清來避免噬菌體。

七、免疫球蛋白
免疫球蛋白的數值能完全體現出采血時的牛齡情況,新生牛血清容易產生IgM,IgG的含量也偏高;胎牛血清不含IgM,IgG的含量也較低??梢酝ㄟ^血清蛋白電泳SDS檢測。
低IgG的胎牛血清推薦適用于抗體生產及相關領域。

有下列情況者,對血清內毒素應格外留意篩選:
1.養干細胞時,干細胞對內毒素非常敏感,如果血清中內毒素≥3EU/ml時,干細胞很容易死亡。很多使用者,在血清在試用前,就通過提早審核該批次《檢測報告》,以決定是否入圍進行試用。
2.養免疫細胞時,過高的內毒素可誘導免疫細胞釋放炎癥因子,抑制小鼠紅細胞集落的形成等。
3.基因敲除相關的細胞實驗,培養的細胞要盡可能保持其原始狀態,任何引導細胞衰老或凋亡的試劑,都會讓后續的實驗結果“失之毫厘,謬以千里”。在準備血清和其他試劑時,選擇極低的內毒素(最好≤1EU/ml),對實驗至關重要;
4.原代培養、雜交瘤融合、細胞轉染,或者肝細胞、神經細胞、內皮等難養細胞的擴增,這些都需要挑選好的血清給細胞以有力支持。因此,挑選更低的內毒素,是保證實驗順利的第一步。
5.實驗室有些細胞,需要長期培養、長期凍存,或者經常復蘇、經常培養的,血清會經?;蜷L時間作用于細胞。為保證細胞的健康,都應該選用更低內毒素的血清,以避免內毒素長久對細胞的毒性影響。
總之,血清中內毒素含量過高,更容易導致細胞“亞健康”,造成數據不準,或細胞狀態不良、老化、甚至死亡,導致試驗中斷失敗。血清中的內毒素越低越好。
全球細胞培養學會均依據內毒素對血清的品質進行分級和命名。
內毒素含量越低的血清,級別就越高,以胎牛血清為例:
當血清中內毒素含量≤10EU/ml時,此血清為特級胎牛血清;
當血清中內毒素含量﹥10EU/ml,≤ 25EU/ml時,此血清為優級胎牛血清;
當血清中內毒素含量≥ 25EU/ml時,此血清為標準級胎牛血清;


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上海傳秋生物科技有限公司
Shanghai Chuan Qiu Biotechnology Co.,Ltd.
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